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细胞危机?EVO视讯教你如何抢救!

来源:陆政亨 日期:2025-07-16

在生物医学领域的日常操作中,我们时常会遭遇一些看似无望的细胞:如细胞变圆、漂浮、不贴壁、颜色变暗、增殖迟缓等情况。我们可能会误以为这些细胞无法存活,急于将其丢弃并更换新细胞。然而,有时候这些看似垂死挣扎的细胞其实处于假死状态,是可以被有效抢救的。本文将帮助科研人员了解在何种情况下细胞的状态虽差,但仍有恢复的希望,从而减少不必要的浪费,节省宝贵的细胞资源,支持更多的生物医学研究。

细胞危机?EVO视讯教你如何抢救!

一、变圆、漂浮≠死亡:细胞贴壁的问题

许多贴壁细胞(如HeLa、293T、MCF-7)在健康状态下应牢牢附着于培养瓶底,但当它们出现以下情况时容易被误判为死亡:气泡、细胞变圆或漂浮。可能的原因包括:在换液或传代操作过于剧烈时,机械扰动或胰酶消化时间过长导致细胞脱附;刚复苏的细胞本身状态较差;培养基不适或血清浓度过低,影响细胞粘附分子的表达。

抢救措施:

  • 静置培养瓶观察24小时,避免频繁晃动;
  • 增加血清浓度(如由10%提升至15%);
  • 使用多聚赖氨酸或明胶包被以增强贴壁能力。

二、颜色发暗、胞浆颗粒增多:应激状态而非死亡

显微镜下,细胞颜色发暗、出现胞浆颗粒或空泡,常被误认为是细胞坏死的迹象。但其实这些现象可能是细胞处于应激反应中,例如:培养基pH变化(颜色发黄或变紫)、缺氧、营养不足或感染等。

抢救措施:

  • 更换新鲜培养基,必要时添加Hepes缓冲剂以维持pH;
  • 检查是否有污染;
  • 补加胰岛素、转铁蛋白、谷胱甘肽等抗应激因子以支持细胞恢复。

三、增殖迟缓甚至停滞:可能只是休眠

细胞状态差常表现为几天都不增殖,特别是在初代细胞或者iPSC类细胞以及神经干细胞等敏感类型中。此类细胞常因胞内调控机制失衡而陷入休眠状态,例如G0期停滞。

抢救措施:

  • 补加适当的细胞因子或小分子化合物(如bFGF、EGF、Y-27632)以刺激激活;
  • 尝试低密度合并培养与健康细胞共养,提高细胞间信号传导;
  • 使用培养基优化试剂包如StemFlex、Neurobasal-B27

四、冻存细胞复苏:可能只是方法不当

在冻存细胞复苏过程中,若贴壁率低或细胞漂浮明显,有时虽然肉眼无法见到,但这可能是操作方法上的问题。例如,复苏后直接离心再换液会导致细胞机械损伤;或去除DMSO不及时造成细胞的毒性暴露。

抢救措施:

  • 尽量快的复苏过程(<1分钟37℃水浴),并直接加入预热的培养基稀释DMSO,而不是立即离心;
  • 添加ROCK抑制剂Y-27632(10μM),显著提高复苏后贴壁率和存活率,尤其对ES/iPS细胞效果显著。

五、染色显示“全死”的细胞也可能有生机

利用台盼蓝(Trypan Blue)或PI染色判断细胞活性时,若染色阳性较多,通常被视为死亡。然而,这也可能是由于细胞膜暂时性破裂或者染色时间过长导致的假阳性。

抢救措施:

  • 使用流式细胞术联合AnnexinV/PI染色以分辨细胞的凋亡与坏死;
  • 让细胞继续培养观察贴壁与增殖情况,而非盲目丢弃;
  • 考虑再培养12到24小时,部分细胞仍可恢复功能。

六、污染≠报废:部分污染是可控的

虽然严重污染(如真菌、细菌大量繁殖)应立即报废,但一些轻度污染或早期污染可以通过适当处理来挽救细胞。

抢救措施:

  • 若培养瓶表面有霉点,可转瓶并添加抗生素,密切观察;
  • 偶发的颗粒状漂浮物可能是血清蛋白析出或培养基变质,并不一定是污染。

许多细胞状态不佳的情况并非不可挽救。在生物医学的日常细胞培养中,我们不仅依赖经验,还需结合科学观察和合理的干预策略。正如在科研中面对的问题一样,细胞看似无望,并不意味着失败。只要采取正确的方法及及时处理,在很多情况下,细胞都能恢复生机,为科研贡献力量。而EVO视讯也会为您提供更先进的细胞培养解决方案,帮助您在科研道路上更加顺利。

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